EF1α-Promotor
EF1α-Promotor bezeichnet einen Promotor des Elongationsfaktors EF1α. Er ist neben dem CAG-Promotor und dem CMV-Promotor einer der meistverwendeten Promotoren in Expressionsvektoren.
| Nukleinsäure | |
|---|---|
| Name | EF1α-Promotor |
| Andere Namen |
|
| Identifikatoren | |
| GenBank | |
| Eigenschaften | |
| Größe |
1907 Basenpaare |
| Struktur | |
| Taxon |
Säugetiere |
Eigenschaften
BearbeitenDer humane EF1α-Promotor steuert in Zellen die konstitutive Genexpression des Elongationsfaktors 1α. Er erzeugt dabei im Vergleich zu vielen anderen Promotoren der Wirtszelle größere Mengen an Proteinen. Dadurch können dem Promotor gentechnisch nachgeschaltete Transgene verstärkt abgelesen werden, wodurch mehr mRNA und in Folge mehr rekombinante Proteine erzeugt werden. Daher wird er zur Überexpression verschiedener rekombinanter Proteine in Zellkulturen von Säugetier-Zelllinien oder -Primärzellen, darunter in humanen T-Zellen[1] und NK-Zellen,[2] CHO-Zellen,[3] Rattenzellen,[4] Rinderfibroblasten,[5] Schweinefibroblasten[6] und Schizosaccharomyces pombe, verwendet.[7] Der essentielle Bereich des EF1α-Promotors ist mit etwa 210 Basenpaaren einer der kürzesten starken Promotoren für Expressionsvektoren.[8]
Zelltypabhängigkeit
BearbeitenDer EF1α-Promotor zählt mit dem CAG-Promotor zu den Promotoren mit gleichmäßig starker Expression in verschiedenen Säugetierzellen.[9]
Störfaktoren
BearbeitenDie Aktivität des EF1a-Promotors kann in transgenen Tieren aufgrund umfangreicher DNA-Methylierung reprimiert werden (Silencing). Daher ist er zumindest für die forcierte Expression einiger Proteine, wie das Beispiel ACE2 zeigt, nicht geeignet.[10]
Literatur
Bearbeiten- D. W. Kim, T. Uetsuki, Y. Kaziro, N. Yamaguchi, S. Sugano: Use of the human elongation factor 1 alpha promoter as a versatile and efficient expression system. In: Gene. Band 91, Nummer 2, Juli 1990, S. 217–223, PMID 2210382.
Einzelnachweise
Bearbeiten- ↑ Y. Lv, F. J. Xiao, Y. Wang, X. H. Zou, H. Wang, H. Y. Wang, L. S. Wang, Z. Z. Lu: Efficient gene transfer into T lymphocytes by fiber-modified human adenovirus 5. In: BMC biotechnology. Band 19, Nummer 1, April 2019, S. 23, doi:10.1186/s12896-019-0514-x, PMID 31014302, PMC 6480437 (freier Volltext).
- ↑ S. V. Kulemzin, D. A. Matvienko, A. H. Sabirov, A. M. Sokratyan, D. S. Chernikova, T. N. Belovezhets, A. N. Chikaev, A. V. Taranin, A. A. Gorchakov: Design and analysis of stably integrated reporters for inducible transgene expression in human T cells and CAR NK-cell lines. In: BMC medical genomics. Band 12, Suppl 2März 2019, S. 44, doi:10.1186/s12920-019-0489-4, PMID 30871576, PMC 6417161 (freier Volltext).
- ↑ M. D. Rocha-Pizaña, G. Ascencio-Favela, B. M. Soto-García, M. L. Martinez-Fierro, M. M. Alvarez: Evaluation of changes in promoters, use of UCOES and chain order to improve the antibody production in CHO cells. In: Protein expression and purification. Band 132, April 2017, S. 108–115, doi:10.1016/j.pep.2017.01.014, PMID 28161546.
- ↑ A. I. Garcia Diaz, B. Moyon, P. M. Coan, N. Alfazema, L. Venda, K. Woollard, T. Aitman: New Wistar Kyoto and spontaneously hypertensive rat transgenic models with ubiquitous expression of green fluorescent protein. In: Disease models & mechanisms. Band 9, Nummer 4, April 2016, S. 463–471, doi:10.1242/dmm.024208, PMID 26769799, PMC 4852507 (freier Volltext).
- ↑ Y. Xie, M. Wang, L. Gu, Y. Wang: CRISPR/Cas9-mediated knock-in strategy at the Rosa26 locus in cattle fetal fibroblasts. In: PLOS ONE. Band 17, Nummer 11, 2022, S. e0276811, doi:10.1371/journal.pone.0276811, PMID 36441701, PMC 9704577 (freier Volltext).
- ↑ S. Petkov, P. Hyttel, H. Niemann: The choice of expression vector promoter is an important factor in the reprogramming of porcine fibroblasts into induced pluripotent cells. In: Cellular reprogramming. Band 15, Nummer 1, Februar 2013, S. 1–8, doi:10.1089/cell.2012.0053, PMID 23379578.
- ↑ A. Matsuyama, A. Shirai, M. Yoshida: A series of promoters for constitutive expression of heterologous genes in fission yeast. In: Yeast. Band 25, Nummer 5, Mai 2008, S. 371–376, doi:10.1002/yea.1593, PMID 18437702.
- ↑ J. Li, Q. Liang, H. Zhou, M. Zhou, H. Huang: Profiling the impact of the promoters on CRISPR-Cas12a system in human cells. In: Cellular & molecular biology letters. Band 28, Nummer 1, Mai 2023, S. 41, doi:10.1186/s11658-023-00454-9, PMID 37198545, PMC 1019003 (freier Volltext).
- ↑ J. Y. Qin, L. Zhang, K. L. Clift, I. Hulur, A. P. Xiang, B. Z. Ren, B. T. Lahn: Systematic comparison of constitutive promoters and the doxycycline-inducible promoter. In: PLOS ONE. Band 5, Nummer 5, Mai 2010, S. e10611, doi:10.1371/journal.pone.0010611, PMID 20485554, PMC 2868906 (freier Volltext).
- ↑ N. Battulin, A. Korablev, A. Ryzhkova, A. Smirnov, E. Kabirova, A. Khabarova, T. Lagunov, I. Serova, O. Serov: The human EF1a promoter does not provide expression of the transgene in mice. In: Transgenic research. Band 31, Nummer 4–5, Oktober 2022, S. 525–535, doi:10.1007/s11248-022-00319-5, PMID 35960480, PMC 9372930 (freier Volltext).