SYPRO Ruby ist ein Fluoreszenzfarbstoff vom Ruthenium-Chelatkomplex-Typ,[1] der zur Färbung von Proteinen im Zuge einer Proteincharakterisierung verwendet wird, meistens in einem Western Blot, in 2D-Gelen oder IEF-Gelen.[2][3][4]

Struktur von SYPRO Ruby, soweit bekannt.[1]

Eigenschaften

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SYPRO Ruby bindet selektiv an basische Aminosäuren[1] von Proteinen (auch Glykoproteine) in SDS-Micellen,[1] nicht jedoch an DNA.[2][5] Die Mutagenität, Reproduktionstoxizität und Karzinogenität von SYPRO Ruby ist unbekannt.[2] Die Absorptionsmaxima liegen bei λ = 280 nm und 450 nm, die Emission ist bei λ = 610 nm maximal.[2] Die Sensitivität bei SDS-PA-Gelen liegt mit SYPRO Ruby bei etwa 1 ng Protein,[2] also etwa vergleichbar mit der Silberfärbung.[6] Aufgrund der Fluoreszenz besitzt die SYPRO Ruby-Färbung bei einer Mengenabschätzung im Vergleich zur Silberfärbung oder Coomassie einen größeren linearen dynamischen Bereich, d. h. eine bessere Korrelation zwischen der Proteinmenge und der Signalintensität.[2][7] Die SYPRO Ruby-Färbung besitzt eine vergleichsweise längere Färbezeit von vier Stunden.

Einzelnachweise

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  1. a b c d Aleksandr Petrovich Demchenko: Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology III: Applications in Sensing and Imaging Band 3 von Advanced Fluorescence Reporters in Chemistry and Biology. Springer 2011. ISBN 9783642180354. S. 181ff.
  2. a b c d e f Datenblatt SYPRO Ruby Protein Gel Stain bei Sigma-Aldrich, abgerufen am 28. November 2013 (PDF).
  3. K. Berggren, T. H. Steinberg, W. M. Lauber, J. A. Carroll, M. F. Lopez, E. Chernokalskaya, L. Zieske, Z. Diwu, R. P. Haugland, W. F. Patton: A luminescent ruthenium complex for ultrasensitive detection of proteins immobilized on membrane supports. In: Analytical biochemistry. Band 276, Nummer 2, Dezember 1999, S. 129–143, ISSN 0003-2697. doi:10.1006/abio.1999.4364. PMID 10603235.
  4. S. Gallagher, D. Chakavarti: Staining proteins in gels. In: Journal of visualized experiments : JoVE. Nummer 17, 2008, S. , ISSN 1940-087X. doi:10.3791/760. PMID 19066521. PMC 3253607 (freier Volltext).
  5. T. Rabilloud, J. M. Strub, S. Luche, A. van Dorsselaer, J. Lunardi: A comparison between Sypro Ruby and ruthenium II tris (bathophenanthroline disulfonate) as fluorescent stains for protein detection in gels. In: Proteomics. Band 1, Nummer 5, Mai 2001, S. 699–704, ISSN 1615-9853. doi:10.1002/1615-9861(200104)1:5<699::AID-PROT699>3.0.CO;2-C. PMID 11678039.
  6. A. Lamanda, A. Zahn, D. Röder, H. Langen: Improved Ruthenium II tris (bathophenantroline disulfonate) staining and destaining protocol for a better signal-to-background ratio and improved baseline resolution. In: Proteomics. Band 4, Nummer 3, März 2004, S. 599–608, ISSN 1615-9853. doi:10.1002/pmic.200300587. PMID 14997483.
  7. M. F. Lopez, K. Berggren, E. Chernokalskaya, A. Lazarev, M. Robinson, W. F. Patton: A comparison of silver stain and SYPRO Ruby Protein Gel Stain with respect to protein detection in two-dimensional gels and identification by peptide mass profiling. In: Electrophoresis. Band 21, Nummer 17, November 2000, S. 3673–3683, ISSN 0173-0835. doi:10.1002/1522-2683(200011)21:17<3673::AID-ELPS3673>3.0.CO;2-M. PMID 11271486.